畜牧与动物医学论文_鹅p21基因克隆、启动子分
2022/01/27文章目录
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样品采集
1.1.2 主要试剂
1.2 方法
1.2.1 总RNA提取
1.2.2 鹅p21基因中间片段扩增
1.2.3 鹅p21基因3′-RACE
1.2.4 鹅p21基因5′-RACE
1.2.5 鹅p21基因5′-侧翼区片段PCR扩增
1.2.6 生物信息学分析
1.2.7 鹅p21基因启动子报告基因载体构建及鉴定
1.2.8 鹅p21基因突变位点报告基因载体的构建
1.2.9 细胞培养、转染和双荧光素酶活性检测
1.2.10 数据分析
2 结 果
2.1 鹅p21基因的扩增
2.2 鹅p21基因5′-侧翼区PCR扩增
2.3 生物信息学分析
2.3.1 鹅p21基因序列分析
2.3.2 系统进化树构建
2.3.3 鹅p21基因5′-侧翼区序列分析
2.4 双荧光素酶报告载体构建及活性分析
2.5 突变载体构建及核心调控元件验证
3 讨 论
3.1 鹅p21基因序列克隆及分析
3.2 鹅p21基因启动子活性及调控元件分析
4 结 论
文章摘要:【目的】分析鹅p21基因的结构和启动子活性,探讨p21基因的转录调控机制。【方法】以泰州鹅为试验对象,通过同源克隆、RACE和生物信息学分析等方法获得鹅p21基因全长序列和5′-侧翼区序列特征;构建6个不同缺失片段的启动子区双荧光素酶报告载体并分析其荧光素酶活性,进而确定p21基因核心启动子区;对核心启动子区转录因子结合位点生肌决定因子（MyoD）（+25～+36 bp）进行定点突变,并构建突变报告基因载体,在C2C12细胞系内初步鉴定鹅p21基因核心转录调控因子。【结果】鹅p21基因cDNA全长1 943 bp,CDS区大小为453 bp,编码151个氨基酸,蛋白序列包含高度保守的CDI家族结合位点。系统进化树分析表明,鹅p21基因与鸭亲缘关系最近,与鸡和火鸡有较强的进化关系。鹅p21基因5′-侧翼区包含启动子元件,-35～+37 bp是核心启动子区,发挥正向调控作用,结合定点突变技术初步鉴定MyoD是鹅p21基因核心转录调控元件。【结论】本研究获得了鹅p21基因完整的cDNA序列和启动子区域,MyoD是p21基因核心转录调控因子,为探究p21基因在鹅胚胎期肌肉发育过程中的调控机制提供理论依据。
文章关键词:
